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      Dou SPTM 免疫組化雙重染色步驟

      發布時間:2013-3-18 10:49:22

      Dou SPTM免疫組化雙重染色試劑盒采用經親和層析純化并生物素化的二抗與鏈霉菌抗生物素蛋白-堿性磷酸酶和鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶交聯,利用不同酶催化不同底物產生不同顏色的沉淀物來特異地反應組織和細胞中不同抗原的存在狀態。其染色步驟如下:?
      1、石蠟切片脫蠟、水化,自來水沖洗;?
      2、根據第一抗體的要求,對組織進行相應的抗原修復;?
      3、除去PBS,切片上滴加過氧化物酶阻斷試劑,室溫下孵育10分鐘。PBS沖洗3×3分鐘;?
      4、除去PBS,切片上滴加正常非免疫動物血清,室溫下孵育10分鐘;?
      5、除去血清,切片上滴加第一抗體,室溫下孵育60分鐘。PBS沖洗3×3分鐘;?
      6、除去PBS,切片上滴加生物素標記的第二抗體,室溫下孵育10分鐘,PBS沖洗3×3分鐘;?
      7、除去PBS,切片上滴加鏈霉菌抗生物素蛋白-堿性磷酸酶試劑,室溫下孵育10分鐘,PBS沖洗3×3分鐘。?
      8、除去PBS,切片上滴加BCIP/NBT顯色試劑顯色,蒸餾水沖洗終止顯色,PBS沖洗3×3分鐘;?
      9、除去PBS,切片上滴加雙染增強試劑,室溫下孵育10分鐘,PBS沖洗3×3分鐘;?
      10、除去PBS,切片上滴加正常非免疫動物血清,室溫下孵育10分鐘;?
      11、除去血清,切片上滴加另一個第一抗體,室溫下孵育60分鐘,PBS沖洗3×3分鐘;?
      12、除去PBS,切片上滴加生物素標記的第二抗體,室溫下孵育10分鐘,PBS沖洗3×3分鐘;?
      13、除去PBS,切片上滴加鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶試劑,室溫下孵育10分鐘,PBS沖洗3×3分鐘;?
      14、除去PBS,切片上滴加新鮮配制的AEC顯色試劑顯色;?
      15、自來水沖洗終止顯色,蘇木素復染,PBS返藍,水性封固劑封固。