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免疫組化組織處理常見問題

發布時間:2013-3-18 14:05:41

一、免疫組化組織常用固定液?
1. 10%中性緩沖福爾馬林固定液:40%甲醛10mL+0.01M pH7.4 PBS 90mL,此為國外推薦的免疫組化通用固定液。?
2. 4%多聚甲醛磷酸緩沖液:多聚甲醛40g與0.1M pH7.4 PB液500mL混合加熱至60℃,攪拌并滴加1N NaOH至溶液清亮為止,冷卻后加PB液至1000mL并充分混勻。?
3. B5(醋酸鈉-升汞-甲醛)固定液:無水醋酸鈉1.25g+升汞6.0g+蒸餾水90mL,三者混合,溶解,使用前加入40%甲醛10mL。本液多用于固定淋巴組織,染色前應進行脫汞沉淀處理。?
4. 95%乙醇。?
二、組織固定注意事項?
1. 手術或穿刺離體組織,應力求保持組織新鮮,勿使其干燥,盡快固定處理。?
2. 組織塊大小以2cm×1.5cm×0.2-0.3cm為適,尤其厚度必須控制在0.3cm以內。?
3. 固定液的量必須足夠,在體積上一般大于組織20倍以上。?
4. 固定時間,小標本為4-6h,大標本為18-24h或更久。但過度固定可降低抗原的活性。?
5. 組織固定后應充分水洗,以減少固定液造成的人為假象。?
三、石蠟切片要求   
? ? 石蠟切片的優點是組織結構保存良好,能連續切片,組織結構清晰,抗原定位準確,在病理診斷和回顧性研究中有較大的實用價值。用于免疫組化的石蠟切片制備與常規HE制片略有不同:?
1、浸蠟、包埋過程中,石蠟應盡可能地保持在60℃以下。?
2、切片厚度3-5μm,淋巴和腎穿組織切片可更薄些。切出的蠟片應完整無缺,無刀痕、顫痕、皺褶、開裂,松解等。?
3、展片可采用二次展片法。?
4、載玻片必須經過防脫處理(邁新產品編號:SLI-2001)。?
備注:二次展片法是指在展片過程中,先將組織切片漂浮在30%-40%的乙醇溶液中,進行第一次展片,然后將切片撈起放入45℃-50℃的水浴鍋中進行第二次展片。此法的優點是乙醇溶液與水之間有一個張力差,這樣處理可得到平整無皺褶的組織切片,但像脂肪之類細胞間粘附性較小的組織接觸乙醇后會散開,不建議采用此法。乙醇的濃度和水浴鍋中水的溫度可視組織的不同和石蠟熔點的高低而作相應的調整。?
四、防脫片處理?
1. 載玻片的清洗:將載玻片浸泡在重鉻酸鉀洗液中24h,用自來水充分洗凈,再用蒸餾水清洗兩次以上,然后將載玻片浸泡在95%乙醇溶液中2h,取出后放入干燥箱烘干即可。?
2. 載玻片上涂防脫粘附劑:常用粘附劑為多聚-L-賴氨酸或APES,具體操作步驟見“防脫片劑使用方法”。 3. 檢測載玻片是否清洗干凈:將已清洗過的載玻片在即用型粘附劑溶液中沾一下,若載玻片潔凈,在提取時,粘附劑呈一層均勻的水膜狀覆蓋在載玻片表面,若呈流水樣流走,則表明載玻片沒有清洗干凈,需要重新清洗。?
免疫組化試劑貯存與使用須知?
為了有效地貯存免疫組化試劑,盡量延長試劑的使用壽命,請注意以下事項:?
1、收到試劑后,根據發貨清單核對,若有誤,請在3天內與本公司聯系。?
2、核對后的試劑應盡快放入4℃冰箱貯存。?
3、凡購有濃縮試劑者,因為包裝規格小,打開瓶蓋之前請稍加離心,以便把試劑沉到瓶底,防止試劑粘在瓶蓋上而造成浪費。?
4、在實驗操作過程中,試劑使用完后及時將剩余的試劑放回原貯存處,試劑在室溫下放置過久,效價容易下降,顯色試劑在光亮條件下放置過久也容易失效。
建立免疫組化實驗室常用設備?