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      IHC技術攻略——組織固定脫水不佳的改進

      發布時間:2021-6-18 10:13:34



      前言:


      制片過程中,經常會遇到石蠟組織切片困難,多半固定脫水步驟沒處理好,即使是固定處理程序沒問題,也可能因為組織本身大小,質地的不同而使得組織蠟塊出現問題。怎么辦?那么快速補救的方法來咯。



      圖片



      制片不是技術活,但是而制出大量優質的切片并非易事,在常規病理制片的過程中,經常會遇到各種原因引起的組織脫水、透明、浸蠟不足、組織切片染色灰白、組織結構不清等問題,導致染色失敗,而胃鏡活檢標本、穿刺等小活檢組織標本,由于組織小,一旦出現上述問題,大多都無法補取材,及時查明失敗原因,積極補救是第一要事。

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      固定不佳

      處理措施:溶掉石蠟,二甲苯脫蠟2h——二甲苯2h——無水乙醇1h——80%乙醇1h后轉入70%甲醛乙醇固定液重新固定,時間根據組織大小確定。

      脫水不到位

      手工處理措施:溶掉石蠟,保持組織內的石蠟成分處于溶融狀態;同時在75℃水浴槽內先后放入裝有丙酮的AB 兩組燒杯,時間差約5min;加熱丙酮,當A杯丙酮沸騰時放入組織塊,可以看到丙酮中逐漸有白色糊狀石蠟沉淀出現,組織塊有液泡冒出;當B杯丙酮沸騰時,迅速將組織塊從A換入B杯中,處理10分鐘,此時丙酮中石蠟沉淀減少,組織塊無或少量液泡冒出;取出組織塊投入75℃石蠟溶液中直至組織塊無氣泡冒出約15min;后續進行常規包埋程序。
      注意:實際操作中根據組織塊體積大小或數量調整AB丙酮處理時間。

      上機處理措施(萊卡):溶掉石蠟后組織放入脫水盒中,將裝有組織的脫水盒有序放置在需清洗的脫水籃中,利用脫水機內標準清洗程序清洗組織。程序為:二甲苯60℃20 min,二甲苯60℃5 min,無水乙醇5 min;程序完成后放入95%乙醇中脫水、脫脂、固定30 min左右,再依次放入85%乙醇中20 min,70%乙醇中20 min;最后將處理后的組織與當日取材的新鮮標本一起進入常規固定、脫水、透明、浸蠟程序。

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      脫水過度

      處理措施:蠟塊粗修后放在冰水中浸泡或用5mmol/L 鹽酸水浸泡或者用氨水等軟化劑軟化,再緩慢仔細地切片,切片時刻度比平時薄一些效果可能會更好。

      成片HE染色失敗

      處理措施1:將蠟塊重新切片,將組織片貼片于防脫載玻片上,65℃ 烤片 30 min,常規脫蠟至水化,將切片放入不銹鋼鍋中水浴加熱煮 30 min,再進行常規HE染色。
      處理措施2:切片,烤片40 min(延長烤片的時間)。常規脫蠟到水,蒸餾水洗后滴加酸蘇木素,放入60℃烤箱中染色3 min,水洗,返藍,水洗,鏡下觀察,因為是酸蘇木素,視染色情況而定可以不分化。流水沖洗15 min,酸化沉淀伊紅1min,上行脫水,透明,封片。
      特別提醒:不同實驗室日常操作步驟略有差別,需根據實際情況調整驗證后采用!

      參考文獻:

      [1] 徐建勤,程國平 . 含蠟組織脫水不足的補救 [J]. 臨床與試驗病理學雜志,2010 ,26(3):378.

      [2]沈貴華,黃建,項征,等. 固定脫水不佳組織樣本改良處理的優選方式[J]. 診斷病理學雜志,2020,27(10):759,761.

      [3]傅春燕,馮德云,楊曉靜,等. 淺談HE制片中組織固定脫水不佳的補救措施[J]. 中國現代醫學雜志,2005,15(15):2379-2380.

      [4]肖飛盈,許林杰?.?組織蠟塊處理過程中出現的問題及解決方法[J].醫藥前沿,2015,5(27):12-13.

      [5]簡明病理學技術,丁偉,王德田主編.