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p53 抗體免疫組化表達模式

發布時間:2021-7-22 11:43:54



p53簡要概述


Tp53基因是位于17號染色體 (17p13.1) 短臂上的抑癌基因。Tp53腫瘤抑制基因與細胞周期調控的精密性、DNA的缺陷損傷復原及關于細胞的分化程度方面、細胞凋亡機制中等重要的生物學功能關系不能忽視,像“分子警察”似的在對于監督觀察、有效制止正常細胞癌變的過程中發揮著的重要作用。

Tp53基因正常表達的蛋白為正常/野生型p53,在所有正常細胞的細胞核中表達,由于半衰期僅10-20 分鐘,通過免疫組織化學不易檢測到。正常/野生型p53蛋白通過與DNA結合,負向調節細胞生長和分裂。在DNA損傷的情況下,正常/野生型p53會阻止細胞周期直到修復發生。如果無法修復,正常/野生型p53會誘導細胞凋亡。
Tp53基因突變與多種癌癥的發生和預后相關,Tp53基因突變后表達的蛋白為突變型p53。TP53基因突變分析最常用的的方法是通過免疫組織化學檢測突變型p53,該方法快速、易于執行。突變型p53對細胞增殖的抑制作用消失,受損傷異常的細胞則失去控制,不斷增殖,腫瘤最終形成。突變型p53不僅能作為多種腫瘤預后不良指標,還能夠協助鑒別診斷惡性病變(原位癌與浸潤性癌)與反應性病變,以及幫助區分漿液性和子宮內膜樣組織型、預測給定組織型內的結果或預測多種組織型的結果。

p53 “陽性” 表達模式?

早期的研究發現非同義Tp53基因錯義突變會導致p53蛋白的核積累,可以通過免疫組織化學檢測到p53蛋白過表達。p53蛋白表達是一種彌漫性強核陽性的形式,涉及至少80%的腫瘤細胞,但通常幾乎為100%。隨著免疫組織化學的不斷完善,觀察到與Tp53基因突變的存在相關的其他異常p53表達模式。因此,不應該將p53染色報告簡單判讀為陽性或陰性,染色模式應判讀為野生型或異常/突變型,而異常/突變型包括了過表達、完全缺失、細胞質表達。p53染色模式異常,幾乎可以肯定Tp53基因存在潛在突變。染色模式如圖1所示。

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圖1. p53表達的不同模式。(A) 子宮內膜樣癌顯示正常野生型p53表達模式,腫瘤細胞核染色比例不同,強度不同。(B) 過表達的3級子宮內膜樣癌,幾乎在所有腫瘤細胞核中都顯示出強染色,與中心成纖維細胞的內部對照相比更強。(C)子宮內膜漿液性癌顯示完全沒有p53表達,內部對照顯示中等至強但可變的染色。(D)子宮內膜樣癌顯示細胞質p53表達,內部對照(基質和正常子宮內膜腺體)顯示細胞核野生型模式。細胞質模式伴隨有相似強度的核染色。



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野生型p53染色模式

正常的野生型模式顯示顯著的染色范圍,從只有很少的腫瘤細胞核呈陽性到大多數細胞核呈陽性(如圖1.A所示)。野生型p53的表達水平取決于細胞的分化狀態并與增殖活性有關。具有較高增殖指數的腫瘤通常顯示出更多的p53染色,而具有所謂“高”野生型染色的腫瘤可能會與過表達相混淆。
值得注意的是,一些剪接位點突變或截斷突變(后者以 c 端停止增益為特征)通過IHC檢測到無功能p53蛋白,染色模式為正常的野生型染色模式。


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異常/突變型---過表達染色模式

非同義Tp53基因錯義突變會導致p53蛋白的核積累,可以通過免疫組織化學檢測到p53蛋白過表達。幾乎在所有腫瘤細胞核中都顯示出強染色,與內部對照中心成纖維細胞相比腫瘤細胞核染色更強(如圖1.B所示)。過表達與野生型的區別主要是觀察腫瘤細胞是否含有陰性、弱陽及強陽性細胞,含有這三種不同染色程度的腫瘤細胞判讀為野生型染色模式,腫瘤細胞幾乎全陽性判讀為異常/突變型中的過表達染色模式。


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異常/突變型---完全缺失染色模式

Tp53基因發生功能喪失突變時,突變型p53在IHC檢測到的染色模式為異常/突變型中的完全缺失(如圖1.C所示)。在判讀為異常完全缺失p53染色之前,必須看到內部對照(成纖維細胞、內皮細胞或淋巴細胞)的充分染色。沒有陽性內部對照的病例是無法判讀的。完全缺失與野生型的區別是觀察內部陽性對照是否成立并且腫瘤細胞是否有弱陽、強陽和陰性細胞。


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異常/突變型---細胞質染色模式-

通過優化免疫組織化學,觀察到第四種不常見的p53染色模式。這種細胞質模式的特征是明確的細胞質染色,并伴隨著可變的核染色(如圖1.D,圖2所示)。一抗濃度過高可能會顯示具有低強度細胞質背景的強彌漫性核染色,應判讀為過表達而不是細胞質模式。在輸卵管卵巢高級別漿液性癌中,細胞質模式與破壞p53蛋白核定位域的突變有關。野生型與細胞質模式區分主要觀察細胞質染色強度,觀察是否明確的弱陽、強陽和陰性細胞以及細胞質的染色是否與與細胞核染色相近。

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圖2. p53細胞質表達模式,細胞質表達伴隨有相似強度的核染色。圖中淋巴細胞陽性。

p53在腫瘤的診斷、分型以及預后的預判有著至關重要的作用。準確地判讀以及有效的免疫組化染色方案是p53結果正確判讀的前提條件。關于p53免疫組化在婦科腫瘤的應用將在下篇文章中詳細介紹,敬請關注。

參考文獻

1. M K?bel,? Piskorz AM, Lee S, et al. Optimized p53 immunohistochemistry is an accurate predictor of TP53 mutation in ovarian carcinoma[J]. Journal of Pathology Clinical Research, 2016, 2(4):247-258.

2. M K?bel, BM Ronnett, N Singh, et al. Interpre-tation of P53 Immunohistochemistry in Endometrial Carcinomas: Toward Increased Reproducibility[J]. International Journal of Gynecological Pathology, 2018:1.